фармацевтическая химия и фармакогнозия. – Национальная медицинская академия последипломного образования имени П. Л. Шупика МЗ Украины, Киев, 2007.
Диссертационная работа посвящена систематическому химико-токсикологическому исследованию зопиклона.
В ходе работы исследовано поведение зопиклона в условиях щелочного гидролиза и пергидролиза, установлены оптимальные условия протекания этих процессов, подтверждено образование при этом 2-амино-5-хлорпиридина (может быть использован как "маркер" наличия зопиклона), а также соединений с альдегидной и пероксокарбоксильной группами. На основе проведенных исследований впервые предложен высокочувствительный специфический комплекс цветных реакций на зопиклон, а также тест-система (химический реактив и способ) для качественного определения веществ, содержащих в своей структуре сложноэфирную группу, найдены условия, в которых она становится специфической для определения зопиклона.
Разработаны чувствительные методики идентификации зопиклона с помощью методов УФ-спектроскопии, тонкослойной (ТСХ) и высокоэффективной жидкостной (ВЭЖХ) хроматографии.
ТСХ-исследование проводили в 16 системах растворителей, 10 из которых признаны стандартными Международным комитетом по систематическому токсикологическому анализу Международной ассоциации судебных токсикологов, 4 системы применяются в общем ТСХ-скрининге органических ядов и 2 системы являются частными для исследования препаратов, производных 1,4-бензодиазепина. Изучено поведение зопиклона и 2-амино-5-хлорпиридина в условиях общего ТСХ-скрининга веществ основного характера, в частности, отношение к групповым проявителям, и предложены новые проявители для специфического обнаружения указанных соединений на основе разработанных нами качественных реакций.
Симптоматика отравлений зопиклоном близка к картине передозировки препаратов группы бензодиазепинов, в связи с этим при отравлении зопиклоном нельзя исключать проведения экспертом направленного анализа на производные 1,4-бензодиазепина. Поэтому в ходе работы проведен кислотный гидролиз зопиклона в условиях, которые применяются в анализе указанной группы препаратов и с помощью методов ТСХ, ВЭЖХ, УФ-, ЯМР 1Н-спектро-скопии и по температурам плавления установлена структура и индивидуальность образующихся при этом продуктов. Установлено, что из кислого гидролизата хлороформом экстрагируется (7RS)-6-(5-хлоропиридин-2-ил)-7-гидрокси-6,7-дигидро-5Н-пирроло[3,4-b]пиразин-5-он, а из нейтрализованного гидролизата – указанное соединение и 2-амино-5-хлорпиридин, которые могут быть "маркерами" при обнаружении зопиклона в химико-токсикологическом анализе. Предложены системы растворителей, позволяющие разделять указанные соединения и продукты кислотного гидролиза препаратов группы бензодиазепинов.
Идентификация зопиклона, 2-амино-5-хлорпиридина и (7RS)-6-(5-хлоропиридин-2-ил)-7-гидрокси-6,7-дигидро-5Н-пироло[3,4-b]пиразин-5-она проведена методом ВЭЖХ с использованием ВЭЖХ-анализатора "Милихром
А-02" (ЗАО "ЭкоНова", Новосибирск, РФ). Установлены основные хроматографические параметры указанных соединений – время и объем удерживания, спектральные отношения, а также минимальная концентрация веществ в растворе, которую можно определить с помощью используемой методики.
Разработаны методики количественного определения зопиклона и его "маркера" – 2-амино-5-хлорпиридина, пригодные для целей химико-токсикологического анализа (спектрофотометрическая, экстракционно-фотометрическая и ВЭЖХ).
Установлены оптимальные условия (природа органического растворителя, рН среды) экстракции зопиклона и 2-амино-5-хлорпиридина из водных растворов органическими растворителями. Наиболее высокую степень экстракции указанных веществ обеспечивают хлороформ и диэтиловый эфир в щелочной среде.
Впервые сравнена эффективность общепринятых в химико-токсикологическом анализе методов изолирования органических ядов основного характера по отношению к зопиклону. Разработан эффективный и экспрессный индивидуальный метод изолирования зопиклона из биологического материала посредством хлороформа и предложены методики выделения зопиклона из биологических жидкостей организма (крови, мочи).
Предложена методика очистки зопиклона от соэкстрактивных веществ в извлечениях из биологического материала с применением метода ТСХ.
Установлено распределение зопиклона в органах отравленных животных и рекомендованы оптимальные объекты для проведения химико-токсикологического анализа. Установлен срок сохраняемости зопиклона в биологическом материале при его гнилостном разложении.
На основе систематических исследований обоснована схема направленного химико-токсикологического анализа биологического материала на зопиклон, которая включает методики его изолирования из биологического материала, идентификации посредством комплекса цветных реакций и методов УФ-спектроскопии, ТСХ и ВЭЖХ, а также количественного определения. Кроме того, внесены дополнения к общим схемам ТСХ-скрининга органических ядов (поиск неизвестного яда и производных 1,4-бензодиазепина), которые позволяют обнаружить зопиклон при проведении ненаправленного исследования.
Ключевые слова: зопиклон, 2-амино-5-хлорпиридин, (7RS)-6-(5-хлоропиридин-2-ил)-7-гидрокси-6,7-дигидро-5Н-пирроло[3,4-b]пиразин-5-он, оптические и хроматографические методы анализа, цветные реакции, кислотный и щелочной гидролиз, пергидролиз сложных эфиров, изолирование из биоматериала.
Кlimenko L. Yu. Chemical-toxicological research of zopiclone. –
A manuscript.
Dissertation for the Candidate's scientific degree in Pharmacy on the speciality 15.00.02 – pharmaceutical chemistry and farmacognosy. – National medical academy of postgraduate education named after P. L. Shupik, Ministry of Public Health of Ukraine, Kyiv, 2007.
Thesis is devoted to zopiclone chemical-toxicological research.
Sensible methods of zopiclone identification by specific complex of coloured reactions, UV-spectroscopy, HPLC and TLC, two test-systems – for esters and zopiclone specific identification, the methods of zopiclone and its "marker" –
2-amino-5-chloropyridine quantitative determination were developed.
Efficiency of general methods of basic organic poisons isolation was comparative and individual method of zopiclone isolation from biomaterial was developed.
Scheme of chemical-toxicological analysis of biomaterial for zopiclone and additions to general schemes of organic matters TLC-screening, which allow not to lose zopiclone during undirected research, were grounded.
Key words: zopiclone, 2-amino-5-chloropyridine, (7RS)-6-(5-chloropyridin-2-yl)-7-hydroxy-6,7-dihydro-5Н-pirrolo[3,4-b]pyrazin-5-on, optical and chromatographic methods of analysis, coloured reactions, acid and alkaline hydrolysis, esters perhydrolysis, isolation from biomaterial.